荧光比分析,荧光分析的计算公式

为什么分子荧光分析法的灵敏度通常比分子吸光光度法的要高?

因为与分子吸光光度法比较，萤光是从入射光的直角方向检测，即在黑暗背景下检测荧光的发射。分子吸光光度法中有入射光的背景干扰，因而分子荧光分析法的灵敏度通常比分子吸光光度法的要高2——4个数量级。

在吸收光谱中，检测器无法测定光的绝对强度，只能比较两束光的相对强弱（所以测吸收总是需要一个空白样作为参比）。而且溶液通常只能吸收入射光中极小的一部分，所以光线强度减弱是很微小的，就好像原来是10000个单位强度，吸收后变成了9999单位，仪器难以分辨这种微小变化。所以吸收光谱灵敏度不高。

荧光分析法是一种基于分子荧光效应的检测方法，其灵敏度远高于传统的吸收光度法。荧光分析法通过测量荧光强度和激发光强度之间的比例关系，可以实现对被测物质的定量分析。由于荧光分析法具有较高的灵敏度，因此可以用于检测低浓度的物质。

如果透过率为T＝99/100，则吸光度A＝log100/99＝0.004，这个吸光值很低，几乎与噪声相近，可信度下降，几乎无法确定。可是采用荧光法分析（前提是可以产生荧光），通过改变光电倍增管的负高压，可以提高荧光的检测强度，这就是荧光法比紫外可见法灵敏度高的实质。

荧光分析法和磷光分析法的灵敏度比吸收光度法高2-4个数量级。测定下限：0.001 - 0.1 mg/L （ug/mL）磷光分析法与荧光分析法原理类似，荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量，在有荧光发射的同时测量磷光。一般有室温测量和低温（液氮）测量。 主要用于有机物分析，与荧光分析法配合使用。

仪器分析——荧光分析法

荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，但浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用，以及由于在液面附近溶液会吸收激发光，使发射光强度下降，导致发射光强度与浓度不成正比，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。

不同点：吸光光度法是由分子对辐射能选择性吸收由基态或较低能级跃迁到较高能级产生的分子光谱，是分子吸收光谱；而荧光分析法是由分子对辐射能选择性吸收由基态跃迁到单重激发态，当由其第一激发单重态的最低振动能级回到基态各振动能级间的跃迁所产生的分子光谱，是分子发射光谱。

原子荧光光谱法是以原子在辐射能激发下发射的荧光强度进行定量分析的发射光谱分析法。但所用仪器与原子吸收光谱法相近。原子荧光光谱的产生：气态自由原子吸收特征辐射后跃迁到较高能级，然后又跃迁回到基态或较低能级。同时发射出与原激发辐射波长相同或不同的辐射即原子荧光。

原理不同：（1）紫外分光光度计，就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。（2）荧光分光光度法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定。可根据不同的物质其组成与结构调整所吸收的紫外-可见光波长和发射光的波长。

第十二章:荧光分析法

1、第二节 荧光分析法 了解荧光分析法的基本原理和应用；荧光光度计的基本结构。基本原理 荧光的产生：此化学物质能从外界吸收并储存能量（如光能、化学能等）而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射（即发光）。

2、荧光分析法亦称荧光光度分析法，光化学分析法之一。根据被测物质在光照射下所产生的荧光强度来确定其浓度的分析方法。广泛应用于有机化合物的分析，特别对药物在体内代谢的研究，愈来愈多地应用荧光法测定。某些物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的荧光。

3、荧光分析法不断引入新技术，如激光诱导荧光（提升灵敏度，适用于单分子检测）、时间分辨荧光（利用荧光寿命差异进行选择性检测）、同步荧光（选择性扫描波长差）和胶束增敏荧光（增强检测灵敏度）。荧光探针，作为荧光分析的新型工具，能够改变大分子的荧光性质，从而实现更精准的分子识别和分析。

4、荧光分析法是一种灵敏度较高的光学分析方法，常用于定量测定有机化合物。在荧光分析法定量测定时，对溶液的浓度有一定的要求。以下是可能的要求及其原因：浓度范围：荧光分析法通常用于低浓度样品的测定，因为荧光信号与样品浓度的关系通常是在低浓度范围内呈线性，而在高浓度时趋于饱和。

5、因此荧光试剂的使用，对一些原来不发荧光的无机物质和有机物质进行荧光分析打开了大门，扩展了分析的范围。不管是直接测定，还是间接测定，一般的采用标准工作曲线法，取各种已知量的荧光物质，配成一系列的标准溶液，测定出这些标准溶液的荧光强度，然后给出荧光强度对标准溶液的浓度的工作曲线。

6、荧光分析法是一种利用某些物质的荧光光谱特性来进行定性、定量的分析方法。一般所说的荧光分析法，是指以紫外或可见光作为激发光源，所发射的荧先波长较激发光波长要长的分子荧充分析法。